抗體的選擇和保存指南

                       抗體的選擇和保存指南         
  當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們實驗需要的

抗體，并恰當保存使用，是每個科研人員需要細心考慮的。抗體種類繁多，品牌眾

多，技術(shù)參數(shù)不一，價格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買到高質(zhì)量價格合適的抗體

，并準確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細節(jié)需要注意。 
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體 

1、一抗選擇要點 
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。 
（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都

會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類

型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗

驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。 
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗

體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合

你實驗的抗體。 
（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，

待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構(gòu)象的改

變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗

體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍

弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免

）。
2、二抗選擇要點 :
（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源

，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 
（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇

Biotin標記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光

素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
 二、抗體的穩(wěn)定性 
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果。抗體是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一

，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的

結(jié)構(gòu)。
 2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體分子都能

維持正確折疊，保持應有的活性。 
3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體

產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
 4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度

的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。
 三、怎樣確定抗體購買渠道和品牌 
    國外抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價格較貴，而且很多抗體品牌本身不

生產(chǎn)抗體，隨著網(wǎng)絡技術(shù)的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關(guān)來

檢索，國外zui大的生物試劑查詢：biocompare，大的生物試劑查詢

：丁香通，來查找我們所需要的產(chǎn)品資料。
 四、怎樣保存已獲得的抗體 
    抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融，收到抗體后請根據(jù)實驗

的需要，對抗體進行分裝，避免同一管抗體反復凍融（反復凍融會導致抗體空間結(jié)

構(gòu)變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）。抗體保存得當與否，直接

決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當，抗體活性大部分都可以維持數(shù)

年。請謹記，無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。
 1. 收到抗體后，請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉

狀態(tài)），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至

5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）。抗體一般使用特制的儲存管，只有在

12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來（即使是在

10000rpm離心也會離心不*，導致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。
 2.（1）對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保

存在-80℃會更好。 
（2）分裝可以zui大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多

次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 
（3）分裝的量以一次實驗用完為好，zui少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小

，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。 
（4）復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。 

（5）抗體工作液應該當天配制當天用完，4℃保存盡量不要超過1天。 
（6）避免將抗體保存在自動除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度

變化造成反復凍融。 
 3.大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。
 4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃

的條件下來完成的。 4℃運輸zui主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害

（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多

了一次凍融的過程），所以運輸過程中避免干冰運輸。 關(guān)于*

（sodium azide）的使用： 為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中

（終濃度0.02% (w/v)）。 
   注：*的去除方式 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量

是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa

的濾膜即可將*從抗體中去除。v                     抗體的選擇和保存指南
  當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們實驗需要的

抗體，并恰當保存使用，是每個科研人員需要細心考慮的。抗體種類繁多，品牌眾

多，技術(shù)參數(shù)不一，價格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買到高質(zhì)量價格合適的抗體

，并準確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細節(jié)需要注意。 
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體 

1、一抗選擇要點 
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。 
（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都

會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類

型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗

驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。 
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗

體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合

你實驗的抗體。 
（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，

待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構(gòu)象的改

變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗

體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍

弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免

）。
2、二抗選擇要點 :
（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源

，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 
（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇

Biotin標記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光

素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
 二、抗體的穩(wěn)定性 
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果。抗體是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一

，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的

結(jié)構(gòu)。
 2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體分子都能

維持正確折疊，保持應有的活性。 
3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體

產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
 4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度

的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。
 三、怎樣確定抗體購買渠道和品牌 
    國外抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價格較貴，而且很多抗體品牌本身不

生產(chǎn)抗體，隨著網(wǎng)絡技術(shù)的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關(guān)來

檢索，國外zui大的生物試劑查詢：biocompare，大的生物試劑查詢

：丁香通，來查找我們所需要的產(chǎn)品資料。
 四、怎樣保存已獲得的抗體 
    抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融，收到抗體后請根據(jù)實驗

的需要，對抗體進行分裝，避免同一管抗體反復凍融（反復凍融會導致抗體空間結(jié)

構(gòu)變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）。抗體保存得當與否，直接

決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當，抗體活性大部分都可以維持數(shù)

年。請謹記，無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。
 1. 收到抗體后，請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉

狀態(tài)），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至

5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）。抗體一般使用特制的儲存管，只有在

12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來（即使是在

10000rpm離心也會離心不*，導致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。
 2.（1）對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保

存在-80℃會更好。 
（2）分裝可以zui大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多

次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。 
（3）分裝的量以一次實驗用完為好，zui少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小

，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。 
（4）復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。 

（5）抗體工作液應該當天配制當天用完，4℃保存盡量不要超過1天。 
（6）避免將抗體保存在自動除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度

變化造成反復凍融。 
 3.大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。
 4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃

的條件下來完成的。 4℃運輸zui主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害

（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多

了一次凍融的過程），所以運輸過程中避免干冰運輸。 關(guān)于*

（sodium azide）的使用： 為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中

（終濃度0.02% (w/v)）。 
   注：*的去除方式 可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量

是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa

的濾膜即可將*從抗體中去除。